LUMINEX
Principe
Le Luminex est un équipement développé par la société Américaine du même nom permettant l'application de la technologie xMAP®. Cette technologie, basée sur le principe d'un ELISA combiné à de la cytométrie en flux, permet le dosage simultané de nombreuses cibles protéiques ou nucléiques dans de faibles volumes d'échantillons.
La technologie xMAP® fait appel à l'utilisation de microsphères qui sont soit des billes en polystyrène (∅ 5,6 μm) soit des billes magnétiques (∅ 6,5 μm) colorées par un mélange de deux fluorochromes dont le ratio est connu et parfaitement défini pour chaque type de billes. Il existe ainsi un panel de 100 micro-billes différentes suivant le mélange de fluorochromes réalisé. Ces billes, via leurs groupements carboxylates, servent ensuite de support solide à différentes molécules se liant de façon covalente par des groupements aminés. Ces molécules peuvent être de nature variable et les plus courantes sont :
Une fois les molécules d'intérêt fixées à la surface des billes, ces dernières sont incubées avec les échantillons à analyser. Après avoir suivi un protocole expérimental de type ELISA, les résultats sont obtenus par lecture sur un Luminex qui, grâce à un module de pipetage et de gestion des fluides, aspire les échantillons contenant les billes en suspension dans une veine liquide de manière à ce qu'elle soient les unes à la suite des autres (analogie avec la cytométrie de flux) puis excitées par un jeu de deux lasers:
La technologie xMAP® fait appel à l'utilisation de microsphères qui sont soit des billes en polystyrène (∅ 5,6 μm) soit des billes magnétiques (∅ 6,5 μm) colorées par un mélange de deux fluorochromes dont le ratio est connu et parfaitement défini pour chaque type de billes. Il existe ainsi un panel de 100 micro-billes différentes suivant le mélange de fluorochromes réalisé. Ces billes, via leurs groupements carboxylates, servent ensuite de support solide à différentes molécules se liant de façon covalente par des groupements aminés. Ces molécules peuvent être de nature variable et les plus courantes sont :
- des antigènes purifiés,
- des récepteurs,
- différents anticorps de capture,
- des sondes nucléiques.
Une fois les molécules d'intérêt fixées à la surface des billes, ces dernières sont incubées avec les échantillons à analyser. Après avoir suivi un protocole expérimental de type ELISA, les résultats sont obtenus par lecture sur un Luminex qui, grâce à un module de pipetage et de gestion des fluides, aspire les échantillons contenant les billes en suspension dans une veine liquide de manière à ce qu'elle soient les unes à la suite des autres (analogie avec la cytométrie de flux) puis excitées par un jeu de deux lasers:
- un laser rouge permettant de déterminer le code couleur de chaque bille,
- un laser vert excitant un fluorochrome couplé à une molécule reporter qui permet de détecter et de doser l'intéraction antigène-anticorps ou sonde-amplicon.
Equipement
L'IFR 125 est doté d'un Luminex 100 ® IS QIAGEN comprenant :
- un lecteur LiquidChip
- un support de plaque multipuits
- un module de traitement des fluides
- un ordinateur permettant l'analyse des résultats à l'aide du LiquidChip Analyser Software
Prestations
Pour chaque projet de recherche qui nous est soumis, nous réalisons une étude de coût et un devis correspondant. Ainsi les tarifs proposés sont calculés au cas par cas et peuvent varier d'un projet expérimental à un autre.
De manière générale il est possible de distinguer trois grands types de prestations différentes :
Dans le cadre de la seconde prestation, les ingénieurs de la plate-forme se chargent de la préparation des échantillons à l'aide d'un kit commercial et réalisent la lecture et l'analyse des résultats. Le kit commercial pourra être fourni par l'initiateur du projet ou acheté par l'IFR (auquel cas le coût du kit sera à inclure dans le devis).
Dans le cadre de la dernière prestation, les ingénieurs de la plate-forme se chargent de la préparation des échantillons à l'aide d'un protocole propre au projet et qui sera fourni par l'initiateur du projet. Il s'agira par exemple d'un cas pour lequel il n'existe aucun kit commercial disponible. Le responsable du projet devra ainsi fournir les billes 'à façon' ainsi que les anticorps secondaires qu'il aura produit lui-même ou qu'une société de service aura produits pour lui.
Suivant le nombre d'échantillons à tester, l'IFR se réserve le droit d'exiger que les échantillons soient fournis en format de plaques 96 puits.
De manière générale il est possible de distinguer trois grands types de prestations différentes :
- la lecture et l'analyse sur Luminex d'échantillons déjà préparés dans une ou plusieurs plaques
- la préparation d'échantillons à l'aide d'un kit commercial et leurs analyses sur Luminex
- la préparation d'échantillons et leurs analyses sur Luminex à l'aide d'un protocole 'à façon'
Dans le cadre de la seconde prestation, les ingénieurs de la plate-forme se chargent de la préparation des échantillons à l'aide d'un kit commercial et réalisent la lecture et l'analyse des résultats. Le kit commercial pourra être fourni par l'initiateur du projet ou acheté par l'IFR (auquel cas le coût du kit sera à inclure dans le devis).
Dans le cadre de la dernière prestation, les ingénieurs de la plate-forme se chargent de la préparation des échantillons à l'aide d'un protocole propre au projet et qui sera fourni par l'initiateur du projet. Il s'agira par exemple d'un cas pour lequel il n'existe aucun kit commercial disponible. Le responsable du projet devra ainsi fournir les billes 'à façon' ainsi que les anticorps secondaires qu'il aura produit lui-même ou qu'une société de service aura produits pour lui.
Suivant le nombre d'échantillons à tester, l'IFR se réserve le droit d'exiger que les échantillons soient fournis en format de plaques 96 puits.
➔ Détail des tarifications
Références
V. Moalic, B. Mercier et C. Ferec, Technologie Luminex™ : principe, applications, et perspectives, Immuno-analyse & Biologie spécialisée 19 (2004) 181–187.
J. Dasso, J. Lee, H. Bach and R.G. Mage, A comparison of Elisa and flow microsphere-based assays for quantification of immunoglobulins, J Immunol Methods 263 (2002), pp. 23–33.